Eksozomlar, kanser hücreleri ve bağışıklık hücreleri de dahil olmak üzere birçok hücre türü tarafından salgılanabilen, endositik kökenli, nano ölçekli (30-100 nm çapında) tek zarlı organellerdir. Ekzositoz sürecinin başlaması ile birlikte birçok biyoaktif madde taşıyabilmektedirler (Sitozolik proteinler (onkoproteinler, tümör baskılayıcı proteinler ve transkripsiyonel düzenleyiciler dahil), Lipitler (fosfatidilkolinler, fosfatidiletanolaminler ve fosfatidilserin dahil), DNA (tek iplikli DNA ve genomik DNA), RNA'lar (mRNA, 1nRNA, miRNA ve ncRNA'lar). Kanser patogenezinde eksozomların rol aldığı son zamanlarda yapılan araştırmalarla sunulmuştur. Birçok araştırmacı, hastalığın ilerlemesi sırasında gliomaların eksozomları saldığını göstermişlerdir. Bu eksozomlar, endositoz veya lipid membran füzyonu yoluyla çevredeki hücrelere miRNA'ları iletebilir, böylece hücrelerin homeostazını yok edebilir. Biyolojik davranışta tümör özellikleri gösterir ve malign hücre proliferasyonunu ve invazyonunu destekler. Projemizin asıl amacı nöron hücresi ve GBM kanser hücresi eksozomlarına ait miRNA gen seviyeleri arasındaki farklılıkları ortaya koyarak GBM kanserinin kanser mikroçevresinde meydana getirdiği değişiklikleri anlamamızı sağlamaktır. Bu çalışmamız sayesinde nöron hücrelerinde meydana gelen kalıcı inflamasyon ve hasarın kaynağı tespit edilmeye çalışılacaktır. Ayrıca, GBM kanserli kişilerin sağ kalımı için yeni tedavi yaklaşımlarının geliştirilmesine olanak tanıyacaktır.Bu amaçla öncelikli olarak nöron hücresi ve T98 G hücre hatlarından eksozom izolasyonu yapılacaktır. Daha sonra elde edilen eksozomların Real Time PCR ile gen ekspresyon düzeyleri araştırılacaktır. miRNA: 21, 222, 9 ve 26 gen seviyelerindeki değişim nöron hücreleri ile kıyaslanacak sonuçlar istatistiksel olarak değerlendirilecektir.
Eksozomların neredeyse tüm vücut hücrelerinden salgılanmaktadır. Eksozomlar hücresel iletişimde önemli rol oynadığı bilinmektedir. Kanserden izole edilen eksozomların ise immun sistemin baskılayıcı olduğu gösterilse de toksik etkilerinin olduğu da düşünülmektedir. Çalışmamızda kolon kanserinden elde ettiğimiz eksozomların karakterizasyonu ve izole edilen eksozomların fibroblast hücreleri üzerinde oluşturacağı olası toksisitenin farklı sitokinlerin üzerindeki etkilerin araştırması düşünülmüştür. Bu çalışmada eksozom izolasyonu ultra santrifüj yöntemiyle kolon kanseri hücrelerinden yapılacaktır. Eksozom karakterizasyonu sem, zeta potansiyel ve Qtof yöntemleri ile gerçekleştirilecektir. Çalışmanın devamında fibroblast kültürleri hazırlanacaktır. Eksozomların toksik etkilerinin araştırılması için MTT, TAS-TOS testleri yanı sıra Il1, Il6, Il8, Il10 ve Il12 genleri bakılacaktır.
DMD hastalığı
doktora tez